Kultur Embryonic Stem Cells (ESC) Primer Mencit Pasca Vitrifikasi Blastosis pada Rat Embryonic Fibroblasts (REF) Feeder Cells

Abstract

Abstract
Vitrification is a cryopreservation technique that is widely used for blastocysts. The vitrification disadvantage is
the cryoprotectant toxicity that decrease blastocysts quality as the embryonic stem cells (ESC) source. One of the
mouse ESC culture systems is using a feeder cells. Evaluation of rat embryonic fibroblast (REF) feeder cells
ability to support the development of mouse ESC primary cells post-vitrified blastocysts has not been reported. The
purpose of this study was to analyze the ability of REF cells to support the growth and pluripotency of primary
cells ESC colonies post-vitrification blastocysts. Blastocysts were obtained from mice with 4 days of gestation.
Blastocysts vitrification and warming were carried out gradually. Post-vitrification blastocysts were divided into
2 groups: cultured without and with REF feeder cells. The results showed that vitrification significantly reduced
blastocysts recovery rate (p <0.05). Blastocysts were attached to the dish on the 2nd day of culture. The
attachment rates of the both treatments were not significantly different (p > 0.05). The primary cells colonies
formation that were cultured using a feeder cells were higher (p < 0.05) than those cultured without feeder cells.
Colonies which were cultured using feeder cells were dominated by medium and large colonies, while those
cultured without feeder cells were dominated by small ones. Colonies that were cultured using feeder cells were
more pluripotent than those cultured without feeder cells. The conclusion of this study is that REF feeder cells are
able to support the growth and pluripotency of ESC primary cells colonies post-vitrification blastocyst.
Keywords: Blastocysts; Embryonic stem cells; Feeder cells; Rat embryonic fibroblast; Vitrification

Abstrak
Vitrifikasi adalah teknik kriopreservasi yang banyak digunakan pada penelitian blastosis. Kelemahan dari teknik
ini adalah adanya faktor toksisitas krioprotektan yang mengakibatkan penurunan kualitas blastosis sebagai sumber
embryonic stem cells (ESC). Salah satu sistem kultur ESC mencit yang sudah banyak dilakukan adalah
menggunakan feeder cells. Evaluasi mengenai kemampuan feeder cells rat embryonic fibroblast (REF) dalam
mendukung perkembangan koloni sel primer ESC mencit yang berasal dari blastosis vitrifikasi belum dilaporkan.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis kemampuan sel REF dalam mendukung pertumbuhan dan
pluripotensi koloni sel primer embryonic stem cells (ESC) pasca vitrifikasi blastosis. Blastosis diperoleh dari
mencit dengan usia kebuntingan 4 hari. Vitrifikasi dan penghangatan blastosis dilakukan secara bertahap.
Blastosis hasil vitrifikasi dibagi menjadi 2 kelompok yaitu dikultur tanpa feeder cells dan dikultur menggunakan
feeder cells REF. Hasil penelitian menunjukan bahwa vitrifikasi menurunkan recovery rate blastosis (p < 0.05).
Blastosis melekat di dasar cawan pada hari ke-2 kultur. Tingkat perlekatan kedua perlakuan tidak berbeda nyata (p
> 0.05). Tingkat pembentukan koloni sel primer ESC yang dikultur menggunakan feeder cells lebih tinggi (p <
0.05) dari pada yang dikultur tanpa feeder cells. Koloni yang dikultur menggunakan feeder cells didominasi oleh
koloni yang berukuran sedang dan besar, sedangkan yang dikultur tanpa feeder cells didominasi oleh koloni yang
berukuran kecil. Koloni yang dikultur menggunakan feeder cells lebih pluripoten dibandingkan yang dikultur
tanpa feeder cells. Kesimpulan dari penelitian ini adalah feeder cells REF mampu mendukung pertumbuhan dan
pluripotensi koloni sel primer ESC pasca vitrifikasi blastosis.
Kata kunci: Blastosis; Embryonic stem cells; Feeder cells; Rat embryonic fibroblast; Vitrifikasi